样板细节

文件 冰冻切片的免疫染色方案

方法 

第 1 天 

  1. 固定: 
    • 在 4% PFA(4 g 多聚甲醛溶于 100 ml PBS 中)中固定 6-20 小时。 
  2. 蔗糖脱水: 
    • 在 30% 蔗糖中放置 2 天。 
  3. OTC 包埋及冰冻切片制备(10 um)。 
  4. 用 TBST 洗涤 3 次。 
  5. 抗原修复: 
    • 将柠檬酸钠缓冲液(pH 6.0)置于微波炉中加热至98°C,并维持20分钟。 
    • 而后冷却至室温(10-20 分钟)。 
  6. 用 TBS 冲洗后,再洗涤两次,每次5 分钟。 
  7. 在含 0.1% 吐温 20、10% 山羊血清、1% BSA 及 0.3 M 甘氨酸的TBS 中封闭。 
  8. 使用TBS稀释一抗,在 4°C 条件下孵育过夜。 
    • 将一抗稀释至厂家推荐的浓度或采用梯度稀释测定的最佳浓度。建议进行浓度梯度测试。 

第 2 天 

  1. 用 TBST 冲洗两次后,再冲洗 3 次,每次 10 分钟。 
  2. 使用TBS稀释二抗,室温下孵育 1 小时。 
  3. 在摇床上用 TBST 洗涤玻片 3 次(每次 3 分钟)。 
  4. 用封片剂进行封片。 
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